抽絲剝繭探案三：難以捉摸的保留時(shí)間漂移

先來看看備案筆錄：

User：老師，發(fā)現(xiàn)主峰每一針都向后移動(dòng)半分鐘。

Engineer：只有保留時(shí)間移動(dòng)？峰型和柱效有變化嗎？

User：沒有，用了一個(gè)星期，峰已經(jīng)從5分鐘漂到10分鐘了。

Engineer：手動(dòng)混勻走單泵還是雙泵用的混合器走樣？

User：單泵……

客戶做某單糖衍生成鹽的物質(zhì)A，色譜條件：

色譜柱：氨基柱，4.6×250mm，5μm。

柱溫：35℃；

流動(dòng)相A：乙腈，流動(dòng)相B：硫酸緩沖溶液（取磷酸氫二鉀7.0g，用2000mL水溶解，加氨水0.5mL，用磷酸調(diào)節(jié)pH至7.5）；流動(dòng)相比例：流動(dòng)相A：流動(dòng)相B=75：25；

流速：1.5mL/min；

紫外檢測(cè)波長：195nm；

進(jìn)樣體積：20μL。

樣品由1：1乙腈水溶解制得。

客戶小姐姐在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)在一個(gè)序列中保留時(shí)間有規(guī)律的后延，客戶講述峰形沒有太大變化，峰面積RSD也還好，換過不同的實(shí)驗(yàn)人員多次重新配置了流動(dòng)相，均存在這個(gè)問題，色譜圖如下：

漂移色譜圖

漂移重疊的色譜圖

這里要特別指出，用戶小姐姐用的色譜柱和色譜儀不是月旭品牌的，僅僅是基于用戶小姐姐對(duì)我們?cè)滦窆こ處煹男湃危蛭覀兊匿N售工程師尋求指導(dǎo)幫助，我們都是做好事不留名的月旭人。

我們先來羅列一些導(dǎo)致保留時(shí)間漂移的原因，再結(jié)合用戶的色譜圖來分析一下。

導(dǎo)致保留時(shí)間漂移的可能原因及解決辦法：

1、色譜柱原因：

1）柱子沒有達(dá)到平衡

解決辦法：延長平衡時(shí)間。

2）色譜柱污染或鍵合相流失

解決辦法：更換新柱。

2、儀器原因：

1）柱溫箱溫度變化

解決辦法：保持室溫恒定，柱溫設(shè)定正確且恒定。

2）儀器原因?qū)е碌牧鲃?dòng)相比例變化，如混合器，比例閥出現(xiàn)故障。

解決辦法：排查儀器流速恒定，檢查比例閥及混合器是否正常。

3、流動(dòng)相配置原因

解決辦法：重新配置流動(dòng)相，確保配置比例準(zhǔn)確，對(duì)于易揮發(fā)的正相體系可使用安全瓶蓋防止揮發(fā)；在使用緩沖鹽的體系保證緩沖鹽沒有沉淀或析出，pH恒定。 

4、系統(tǒng)漏液

解決辦法：排查系統(tǒng)的各接口處是否漏液，觀察壓力波動(dòng)情況以及壓力線。如有漏液應(yīng)重新連接管路擰緊。 

5、樣品自身原因，如樣品降解，保留時(shí)間發(fā)生變化

解決辦法：研究更利于樣品穩(wěn)定的流動(dòng)相及溶劑體系。

1、重配流動(dòng)相

2、排查儀器

3、排查柱子

如此有規(guī)律的變化，考慮儀器的原因比較大。我們依據(jù)用戶的陳述來判斷一下：

首先用戶說柱溫箱溫度設(shè)定沒問題而且溫度恒定，我們排除這個(gè)原因。

其次小姐姐說他們是等度而且是預(yù)混合之后才上機(jī)的，并且多人多次配置，這樣基本可以排除流動(dòng)相的問題。

第三，針對(duì)色譜柱的問題客戶強(qiáng)調(diào)他們延長了平衡時(shí)間，而且分不同工作日跑了幾次序列均存在這個(gè)問題，故可以排除色譜柱的問題，最后只剩下儀器的問題了，由于用戶沒有時(shí)間慢慢排查，換了一臺(tái)儀器，保留時(shí)間漂移的問題沒有再出現(xiàn)，至此謎底解開了。

Engineer: 老師您好，換了儀器之后，問題有改善嗎？

User: 昨天換了兩臺(tái)儀器，有一臺(tái)儀器跑出來的時(shí)間漂移不明顯，可以接受！

Engineer: 這根柱子比較特殊，現(xiàn)在漂移情況如何？

User: 嗯嗯，做了一天下來，漂移不到1分鐘。

Engineer: 太好了！

征求用戶同意我們編輯了本文，分享給更多的用戶小伙伴，當(dāng)實(shí)驗(yàn)過程中遇到保留時(shí)間漂移的情況時(shí)莫慌，我們可以逐一排查儀器、色譜柱、流動(dòng)相、樣品等因素，色譜圖是以上各部分綜合作用產(chǎn)生的結(jié)果，我們只要耐心一一排查就可以找出問題所在。